畜禽粪便中大肠菌群的检测对于保障畜禽养殖环境安全和食品安全至关重要。我国针对畜禽粪便大肠菌群检测制定了相关国家标准，明确了检测的具体要求和规范步骤。了解这些国家标准和检测步骤能有效提升检测的准确性和科学性，为畜禽养殖相关领域的质量把控提供依据。

畜禽粪便大肠菌群检测的国家标准概述

我国在畜禽粪便大肠菌群检测方面有严格的国家标准，比如GB/T 4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》就涉及到相关内容。该标准规定了大肠菌群在食品等相关样品中的检测方法，但对于畜禽粪便这类特殊样品也有相应的延伸应用。标准中明确了培养基的要求，例如乳糖胆盐发酵管等培养基的成分和配制方法都有详细规定，以确保能够准确培养出大肠菌群。

国家标准还对大肠菌群的计数方法进行了规范，要求采用平板计数法等特定的计数方式，并且对结果的报告也有明确规定，要以最可能数（MPN）法等来报告检测得到的大肠菌群数量，确保不同实验室之间检测结果的可比性。

畜禽粪便大肠菌群检测前的准备工作

首先要准备合适的采样工具，比如无菌采样瓶、采样铲等，这些工具必须确保无菌，以避免采样过程中引入其他杂菌干扰检测结果。然后需要准备检测所需的试剂和培养基，按照国家标准准确配制好乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂平板等相关培养基。

同时，要对检测所用的仪器设备进行校准和检查，比如恒温培养箱要确保温度能够稳定控制在规定的36℃±1℃左右，移液器要校准到准确的量程范围，保证移液的准确性。还需要对检测环境进行清洁和消毒，将检测所用的操作台等区域进行彻底清洁后用合适的消毒剂进行消毒，创造一个无菌的检测环境，防止环境中的杂菌影响样品的检测。另外，检测人员要做好个人防护，穿戴好无菌手套等防护用品，避免自身携带的杂菌污染样品。

样品采集步骤

采集畜禽粪便样品时，要选择有代表性的部位进行采集。比如在畜禽的粪便堆积处，选取不同深度、不同位置的粪便作为样品。采样时，用无菌采样铲铲取适量粪便，迅速放入无菌采样瓶中。采样量要满足检测需求，一般每个样品采集约25克左右的粪便为宜。

采集完样品后，要尽快进行检测，如果不能及时检测，需要将样品置于合适的条件下保存，一般是4℃左右冷藏保存，但保存时间不宜过长，尽量在2小时内进行检测，以防止样品中的大肠菌群数量发生变化，影响检测结果的准确性。

乳糖胆盐发酵试验步骤

首先，吸取10mL无菌生理盐水加入到装有25克畜禽粪便样品的无菌均质袋中，充分均质，制成1:10的样品匀液。然后，用无菌移液管吸取1mL样品匀液注入到装有5mL乳糖胆盐发酵管中，同时设置空白对照管，即只加入5mL乳糖胆盐发酵管而不加入样品匀液的对照管。

将接种好的发酵管置于36℃±1℃的恒温培养箱中培养24小时±2小时。培养结束后，观察发酵管的情况，如果发酵管内产生气泡，且液体颜色变黄，说明样品中可能存在大肠菌群。因为大肠菌群能够发酵乳糖产酸产气，所以出现这样的现象是初步判断有大肠菌群存在的依据。

分离培养步骤

对于经过乳糖胆盐发酵试验初步判断有大肠菌群存在的发酵管，需要进行分离培养。用接种环从发酵管中蘸取少量培养物，接种到伊红美蓝琼脂平板上。接种时要采用平板划线分离法，通过连续划线的方式将样品中的微生物分散开来，以便得到单个的菌落。

划线完毕后，将平板倒置，放入36℃±1℃的恒温培养箱中培养18小时±2小时。培养结束后，观察伊红美蓝琼脂平板上的菌落形态，大肠菌群在伊红美蓝琼脂平板上形成的菌落具有特定的特征，一般为深紫色、中心深色、周围有金属光泽的菌落，当然也有一些菌落可能颜色稍浅，但也具有大肠菌群的特征，通过观察菌落形态可以进一步筛选出可能的大肠菌群菌落。

证实试验步骤

从伊红美蓝琼脂平板上挑取可疑的大肠菌群菌落，接种到装有乳糖发酵管的试管中，同样设置空白对照管。然后将接种好的乳糖发酵管置于36℃±1℃的恒温培养箱中培养24小时±2小时。

培养结束后，再次观察乳糖发酵管的情况，如果发酵管内产生气泡且液体变黄，就可以证实该菌落为大肠菌群。因为只有大肠菌群能够在乳糖发酵试验中再次表现出产酸产气的现象，从而证实所挑取的菌落是大肠菌群。通过这一系列的证实试验步骤，可以准确确定样品中是否存在大肠菌群以及大肠菌群的数量情况。

结果计算与报告

根据MPN计数表来进行结果计算。首先要根据样品的稀释度和阳性管的数量来查找MPN计数表。例如，如果是1:10、1:100、1:1000三个稀释度，分别接种若干管后，统计每个稀释度下的阳性管数，然后对照MPN计数表查找对应的大肠菌群数量。

计算出样品中的大肠菌群数量后，要按照国家标准规定的格式进行报告，报告中要包含样品的详细信息、检测所采用的方法以及最终计算得到的大肠菌群数量等内容，确保检测结果能够被准确记录和查阅。在结果计算过程中，要保证稀释度的计算准确，每一步的稀释操作都要严格按照规范进行，以避免计算错误导致结果不准确。同时，报告的内容要清晰、准确，便于相关人员对畜禽粪便的大肠菌群情况进行了解和应用。